Mesure de la croissance bactérienne

Mesure de la croissance d’E.Coli en milieu nutritif complexe non renouvelé

But : étudier la croissance exponentielle de l’espèce en milieu liquide LB à 37°C pour déterminer lesparamètres de la croissance.
Mode opératoire : on mesure l’absorbance du trouble du milieu en fonction du temps par spectrophotométrie (toutes les 20min). La croissance est faite enconditions idéales (substrat en large excès et conditions physicochimiques stables). Après une durée, qui varie en fonction des cultures, la croissance s’arrête.
Résultats :
Temps (min) |0 | 20 | 40 | 60 | 80 | 100 | 120 | 140 | 160 | 180 | |
DO (600nm) | 0.007 | 0.022 | 0.037 | 0.084 | 0.175 | 0.307 | 0.410 | 0.552 | 0.620 | 0.690 |

Interprétation : descriptioncourbe A600 = f(temps en min)
• pas de phase de latence car on a commencé avec une pré-culture de 18h.
• phase exponentielle de 0 à 90min : les cellules sont en étatphysiologique optimal, la vitesse spécifique de croissance est maximale et le temps de génération est minimal.
• phase de ralentissement de 90 à 180min : la croissance ralentie car lessubstrats commencent à s’épuiser et le milieu contient des déchets toxiques.
Détermination des paramètres de croissance :
Temps de génération : G est le temps nécessaire pour que lapopulation bactérienne double. On peut remarquer qu’en phase exponentielle l’absorbance mesurée (proportionnelle à la biomasse) double entre 2 mesures.
Donc G = 20min

Vitesse spécifiquede croissance : µ correspond au nombre de divisions par unité de temps, c’est le facteur de proportionnalité qui est dépendant de la bactérie et des conditions de culture.
N = N0 .eµt

Quand t = G , N = , , ,

Donc µ = = = 0,0347min-1

Conclusion : E.Coli se divise toutes les 20 minutes et la vitesse de croissance est de 0,0347min-1.